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基因編輯動物凈化之——體外受精
體外受精是基因編輯動物凈化中常用的一項技術(shù)操作，但對于體外受精的各類方法你真的了解嗎?今天小編就帶大家走入體外受精的世界!快來看看與你所知的體外受精有什么不一樣吧!!
從狹義上講，體外受精是指將動物受精過程中的精卵結(jié)合在體外環(huán)境下完成的一種現(xiàn)象，包括自然條件下的體外受精和人為培養(yǎng)條件下的體外受精。而目前所指的體外受精技術(shù)，即為將哺乳動物的精子和卵子置于體外適宜的培養(yǎng)條件下使之完成受精的一種技術(shù)。在生物學中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動物稱試管動物(test-tube animal)。
從廣義上講，體外受精又包含卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)和受精卵的體外培養(yǎng)兩項密切相關(guān)的技術(shù)。
1.體外受精技術(shù)的基本原理
人工模擬體內(nèi)環(huán)境(包括營養(yǎng)、溫度、pH值等)，使初級卵母細胞成熟，同時使精子獲能，最終完成受精作用，并有計劃地保存胚胎。
2.體外受精的主要技術(shù)環(huán)節(jié)
?卵母細胞的獲得和體外成熟、?精子的體外獲能、?成熟卵母細胞與獲能精子的體外受精、?受精卵的體外培養(yǎng)、?受精卵的移植。
3.卵母細胞的采集與體成熟特征
卵母細胞采集
?、俾雅莩槲ǎ河米⑸淦麽橆^穿刺卵泡而將卵母細胞抽吸出來。注射器保持一定負壓，針頭從卵泡側(cè)面刺入，一次進針抽吸卵巢皮質(zhì)多個卵泡，避免污染。
優(yōu)點：回收速度快，不易造成污染;
缺點：容易損傷卵母細胞周圍的卵丘細胞。
②卵泡剝離法：用無菌眼科剪刀或刀片，自卵泡周圍，將周圍組織分離，取下完整的圓形卵泡，放到加油培養(yǎng)液的平皿中，切開卵泡，卵泡液帶著卵母細胞流出。
優(yōu)點：對卵丘-卵母細胞復合體的損傷小;
缺點：程序較為復雜。
?、矍衅史ǎ河闷叫信帕谐山M的剃須刀片縱橫切割卵巢，回收液體放在撿胚皿中，37℃培養(yǎng)箱靜止10min，用注射器吸取上清，鏡檢卵母細胞。
優(yōu)點：回收效率較高;
缺點：費時。
④卵巢解剖法：用手術(shù)刀片將卵巢切為兩半，去掉中間髓質(zhì)部分，露出卵泡，然后用刀片劃破卵泡，在培養(yǎng)液中反復沖洗，采集其中的卵母細胞。
優(yōu)點：能保持卵母細胞周圍卵泡細胞的完整性，回收率相對比較高;
缺點：回收速度相對較慢，容易造成污染。
體成熟特征：
?生發(fā)泡破裂;?染色體凝集;?紡綞體形成;?極體排出;?透明帶軟化;?卵丘細胞擴展。
4.精子制備的方法
卵母細胞采集
?、賾腋》ǎ焊鶕?jù)精子運動上游的特性而將高活力的精子與死精子以及其他精漿成分分開。將精液置于含有1~1.5ml獲能液或受精液的試管底部，在培養(yǎng)箱中孵育10~30min，吸取上層液體，然后離心洗滌1~2次，即可獲得高活力的潔凈精子。
優(yōu)點：適用于精子活力較差的精液;
缺點：精子的可利用率則大大降低。
?、诓Ａ捱^濾：采用玻璃柱層過濾分離，可有效的除去品質(zhì)較差精液中的死精子。
優(yōu)點：制備時間較短;
缺點：器材來源和成本較高，未廣泛應用。
?、圻呖擅芏忍荻入x心：根據(jù)形態(tài)正常的精子密度高于異常，經(jīng)平衡離心后，形態(tài)正常的精子將聚集于高密度的哌可區(qū)域，從而分離得到高收精力的正常精子。常用哌可密度梯度為30%和45%，平衡離心10min(300g)。
優(yōu)點：可分離高質(zhì)量的精子，且精子的利用率較高;
缺點：精子體外受精結(jié)果受哌可質(zhì)量的影響。
?、茈x心洗滌法：取0.1~0.2ml的精液置于離心管中，然后加入5~10ml的獲能液或受精液，離心5min(300g)，去掉上清液后，再加入5~10ml的獲能液或受精液離心洗滌一次，即可用于受精。
優(yōu)點：簡單，精子利用率高;
缺點：對精子沒有分選作用，不宜用于精子活力差和受精力較低的精液。
以上就是小編整理的體外受精各類方法及其優(yōu)缺點，你決定pick哪個呢!讓我們在留言區(qū)見吧!
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